确认培养基适宜性的方案:胰腺大豆琼脂(TSA)

更新时间:2019-07-06 09:21点击数:
[中级原则]
胰酶和大豆木瓜蛋白酶水解产物提供微生物生长所必需的碱性氮和碳源,氯化钠提供合适的生理环境,琼脂是凝结剂。
该培养基不具有选择性,可满足大多数微生物的生长需要。
[必要的紧张]
金黄色葡萄球菌[CMCC(B)26003]
枯草芽孢杆菌[CMCC(B)63501]
铜绿假单胞菌[CMCC(B)10104]
白色念珠菌[CMCC(F)98 001]
黑曲霉[CMCC(F)98003]
[验证方法]
平板注射法,同时使用对照培养基和测试培养基
[细菌溶液的制备和稀释]
1
金黄色葡萄球菌,枯草芽孢杆菌,铜绿假单胞菌
在胰蛋白酶大豆泥的液体培养基中在4代(包括4代)内收集上述菌株的新鲜培养物,并在30-35℃的温度下培养18-24小时。pH 7。
0氯化钠蛋白胨缓冲液或0。
通过稀释10%的9%氯化钠溶液制备含有低于100cfu / ml的细菌悬浮液。
(稀释梯度:金黄色葡萄球菌一般为10-6至10-7,枯草芽孢杆菌为10-5至10-6,铜绿假单胞菌为10-6至10-7)
2
白色念珠菌
在液体沙氏葡萄糖培养基中收集4代(包括4代)中的白色念珠菌的新鲜培养物,并在20-25℃下孵育2-3天。请使用pH 7。
0氯化钠蛋白胨缓冲液或0。
通过稀释10%的9%氯化钠溶液制备含有低于100cfu / ml的细菌悬浮液。
(稀释梯度:通常为10-6至10-7)
3
黑曲霉(Aspergillus niger)
在Sabouraud葡萄糖琼脂的坡度上选择4代(包括4代)内的新鲜培养物,在20-25°C温育5-7天(包括许多黑色菌丝体),0
05%聚山梨醇酯80,pH 7。
洗脱氯化钠和蛋白胨缓冲液,孢子。
使用0
05%聚山梨醇酯80,pH 7。
氯化钠蛋白胨缓冲液或含有0。
05%聚山梨醇酯80。
通过稀释10%的9%氯化钠溶液制备含有低于100cfu / ml的细菌悬浮液。
(稀释梯度:通常为10-5至10-6,取决于菌丝的数量,可能有误差)
[培养基的制备]
测试介质:称量介质12
将0 g放入300 ml纯净水中,均匀悬浮,在121°C的高压灭菌器中灭菌15分钟,灭菌后搅拌,避免琼脂积聚在容器底部,搅拌至44°C我戴上它。
保温并储存在5°C水浴中。
控制介质:根据规范中的关系,其他步骤与前一步骤相同。
[实验方法]
1
阳性培养基组:稀释1ml每种测试细菌悬浮液并加入无菌培养皿中并立即倒入44℃。
在5°C摇匀15至20 ml培养基。
对每种测试细菌进行平行对照。
2
阴性中间组:测试培养基和对照培养基,各自用作空白对照,即,不添加细菌溶液,仅倒入培养基。
3
根据上述说明操作对照培养基和测试培养基接种方法,并在培养皿底部制作分类标记。
4
在培养基固化一段时间后,在3天内在30至35℃的培养箱,金黄色葡萄球菌,枯草芽孢杆菌,铜绿假单胞菌中培养,在5天内培养黑曲霉和白色念珠菌。。
(注意:如果黑曲霉过长,只能在培养3天后计数,因为菌丝太多而无法计数。)

计算并观察殖民地的特征。
【计算方法】
恢复率/生长速度=(阳性培养基组的平均菌落数 - 阴性培养基组的平均菌落数)/(阳性平均对照组的平均菌落数 - 平均菌落数)对照组的阴性平均值×100%。
[确定理由]
当增长率为零时
5比2。
0,菌落大小应与控制手段相匹配,并且测试符合条件。